尊龙凯时细胞培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：生长特性：贴壁生长；冻存条件：无血清冻存液。

培养体系：基础培养基为1:1的MCDB105培养基（含15g/L碳酸氢钠）和M199培养基（含22g/L碳酸氢钠）的混合物，添加15%优质胎牛血清及1%双抗。

传代方法：首次建议采用1:2传代。每两天更换培养液，传代情况需进行记录。如果对比培养效果不理想，建议直接购买我们的尊龙凯时完全培养基。

二、细胞处理流程

收到细胞后，应培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口。这是运输细胞的最佳方式。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后置于超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。建议显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（最好各取40x、100x和200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。

在双瓶传代中，一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶用自配的完全培养基，以便于对比培养。换液后，确保瓶盖轻松拧松。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：

若细胞未超过80%汇合度，收集瓶中的完全培养液至离心管，保留5ml完全培养基，随后放入37℃、5%CO2培养箱继续培养。若细胞密度超过80%，即可进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。如果细胞大多数变圆并脱落，迅速取出，轻敲几下培养瓶后，加入5ml以上培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出后转移至离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，再加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存：

1. 待细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，用5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，沉淀细胞并加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

细胞复苏：

从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；弃去上清，沉淀细胞重新用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶中，在37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养；第二天，更换为新鲜完全培养基。

注意事项

对于某些细胞而言，贴壁不牢，运输过程中可能出现细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多，可以将培养瓶中的培养液收集至离心管进行过渡培养（后续可进行对比培养），沉淀后的细胞可加入胰酶后置于细胞培养箱中培养。

五、售后条款

如细胞出现问题，具体可重发的情况包括以下几点：

1. 在运输过程中遇到的各种问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可申请重发。
2. 如收到细胞48小时内有污染问题，请提供真实的实验结果，经核实后可申请重发。
3. 常温运输的细胞若静置24小时后、干冰运输的细胞复苏后24小时内绝大多数细胞未存活（需提供真实细胞状态照片），可申请重发。
4. 干冰运输的细胞复苏后24小时或常温运输细胞静置4小时后且未开封出现污染问题，申请重发。
5. 如细胞活性问题，需在收到产品7天内提交真实的实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后可申请重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照，3天未告知问题视为产品合格。
7. 4-7天内出现问题需提供收到细胞的前3天照片及出现问题时的照片，和详细操作步骤，经技术人员判定为我方责任的，可申请重发；若判定为双方责任，则需协商处理或按合同价的50%收取重发费用。

如细胞出现问题而不予重发的情况包括但不限于：

1. 客户造成的细胞污染，不予重发。
2. 客户不正确操作导致细胞状态不良，不予重发。
3. 使用非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不良，不予重发。
4. 若细胞状态不好且未提供细胞培养前3天的照片，不予重发。
5. 在细胞培养过程中经其他操作处理的，不予重发。
6. 若在收到细胞2天内未及时告知问题，不予重发。

具体情况将依实际情况裁定。