一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19

生长特性：悬浮生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：初次传代建议比例1:2；传代情况下，每2天更换培养液。

备注：请使用无菌离心管收集培养基以进行过渡对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接购买我们的完整培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞状态良好后，及时添加完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，请用75%酒精喷洒细胞瓶进行全面消毒，之后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱内静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行下一步处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照留存（建议40x、100x和200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后将瓶盖稍微松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞的汇合度未超过80%，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2的孵箱中培养；如果细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS缓冲液对细胞洗涤1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱内消化1-2分钟，然后显微镜下观察细胞消化情况，若大多数细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻敲打培养瓶并加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
将细胞悬液按1：2的比例进行传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

在细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次；
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，倒置观察，待细胞缩回变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
弃去上清后，将细胞沉淀加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期要转入液氮罐中，应在-80℃冰箱中存放至少24小时后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），迅速将其置于37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，再用75%酒精擦拭冻存管外壁；
将冻存管中的细胞转移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
弃去上清，沉淀细胞用5ml完全培养基重悬，再接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养；
第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能不易贴壁，容易发生细胞脱落，这是正常现象。如细胞脱落较多，可将培养瓶内的所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后期用于对比培养），将沉淀加入1-2ml胰蛋白酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后再加入5ml完全培养基以终止消化。再次离心、弃去上清后，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题时哪些情况可重发？判定标准如下：

运输过程中发生各种问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可重发；
细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发；
常温运输的细胞若静置24小时后或干冰运输的细胞复苏后24小时未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片，合乎条件则重发；
干冰运输的细胞复苏后24小时内或常温运输的细胞静置4小时未开封时出现污染，亦可重发；
关于细胞活性的问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，利用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发；
收到细胞当天及第二、第三天请拍照，若三天内未告知视为产品合格。若4-7天内出现问题，须提供收到细胞前三天的照片及相关操作的详细步骤，经技术人员判断责任归属。

2）细胞出现问题时哪些情况不予重发：

客户造成的细胞污染，不予重发；
客户因操作不当导致细胞状态不良，不予重发；
使用非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态问题，不予重发；
细胞状态不良且未提供细胞培养前三天的照片，不予重发；
细胞培养过程有其他处理的，不予重发；
收到细胞后两天内未告知，不予重发；
视具体情况而定。

如需更多信息或支持，请联系尊龙凯时，我们将竭诚为您服务。