在生物医药领域,His标签蛋白的纯化常常面临诸多挑战。这种标签专门设计用于重组蛋白的纯化,通常由6到10个组氨酸残基构成。由于其较小的分子量,对目标蛋白性质的影响较小,因此成为目前应用最广泛的标签。然而,在His标签蛋白的纯化过程中,与金属离子之间的结合强度是一个关键因素,而这一过程受到多个因素的影响,包括Ni的配位情况、标签长度、标签位置(C端或N端)、标签的暴露程度以及缓冲液的pH值等。在实际的纯化过程中,往往会出现部分标签蛋白结合能力弱,导致大量流穿,最终影响目标蛋白的纯度和收率,甚至有可能出现目标蛋白完全不结合的情况。
为了解决传统Ni亲和介质在纯化His标签蛋白时的低结合力问题,尊龙凯时推出了一款新型镍亲和纯化介质——VDXNTANiultra。该介质特别适用于那些传统Ni亲和介质无法有效结合或者结合较弱、流失严重的His标签蛋白。
在应用案例中,实验使用了传统的Ni-NTA和VDXNTANiultra,针对同一标签蛋白在相同条件下进行纯化。实验结果显示,在相同的上样条件下,传统的Ni-NTA在结合和洗杂过程中均发生了大量目标蛋白损失,显著降低了回收率。而尊龙凯时的VDXNTANiultra则展示出更强的结合力,显著减少了在结合和洗杂过程中的蛋白损失,回收率远高于传统的Ni-NTA。
具体的层析条件如下:层析柱使用VDXNTANiultra和传统的Ni-NTA,选择5mL柱,高度为10cm;样品为大肠杆菌裂解液,平衡液为50mM PB,300mM NaCl,pH 8.0,洗脱液为50mM PB,300mM NaCl,500mM咪唑,pH 8.0,流速为1mL/min。
综上所述,选择尊龙凯时的VDXNTANiultra可以显著提升His标签蛋白的纯化效率,为生物医药研究提供可靠的技术支持。