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尊龙凯时荧光定量操作详解与应用

发布时间:2025-03-13   信息来源:宗政珊妍

尊龙凯时的试剂解冻和混匀步骤如下:

尊龙凯时荧光定量操作详解与应用

试剂解冻和混匀

  1. 从冰箱中取出试剂。
  2. 缓慢解冻试剂。
  3. 轻轻摇晃试剂以混匀。
  4. 低速离心。

提示:在混匀过程中尽量避免产生气泡,因为气泡可能会影响酶的活性以及实验结果的准确性。

稀释步骤

  1. 如果需要追踪模板,按以下步骤进行稀释。
  2. 如果不需要追踪模板,则直接用无菌超纯水稀释cDNA,或者使用cDNA原液。

常见荧光定量仪器配置

一般荧光定量仪器为96孔反应,分为12列×8行。以基因1检测为例,建议配置如下:

1. 大体系配置

  1. HieffUNICON®ColorGPSqPCRMasterMix: 10μL。
  2. 正向引物(10μM):0.4μL。
  3. 反向引物(10μM):0.4μL。
  4. RNase-free H2O: 7.2μL。
  5. 总量: 每孔18μL,配置n+1或n+2的总数。

2. 上样体系配置

  1. 准备Mix:18μL。
  2. cDNA模板:2μL。
  3. 将上述溶液加好后,盖紧管盖,轻弹管壁混匀后,短暂离心1-2秒以去除气泡。

确保每一枪的取样中无气泡,以避免实验数据偏差。

实验前准备

在将管子放入仪器之前,须仔细检查确保管盖及管身无污染,管内无气泡,管壁无液体。如果采用常规程序,可进行以下设置:

循环步骤

  1. 预变性:95℃,2分钟,1次。
  2. 变性:95℃,10秒,40次。
  3. 退火/延伸:60℃(可根据引物TM值和目标基因长度),30秒。
  4. 熔解曲线阶段:仪器默认设置1。

如采用快速程序,请确认仪器是否支持快速升温和降温,并进行相应设置。

数据处理

实验完成后,得到的数据可通过尊龙凯时的相关软件进行分析和处理,以确保结果的可靠性。

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