在前四篇推文中，我们探讨了免疫检测技术的基础原理，包括抗原与抗体如何相互识别、显色反应的发生机制，以及信号放大的具体方法。同时，我们也盘点了传统与新兴的免疫检测技术，以了解它们各自的适用场景。本篇将不再讨论理论，而是“下实验室”，聚焦于免疫检测中不可或缺的关键试剂，讲解它们的作用及选择的要点。

1. 一抗（Primary Antibodies）

简单而言，一抗就像“侦探”，专门识别和结合目标分子（抗原）。它们具有独特的特异性，只关注特定的抗原。一抗在免疫检测中的主要作用是定位并稳固绑定目标抗原，构成整个免疫检测的核心环节。失去一抗，后续的显色反应便无从谈起。

2. 二抗（Secondary Antibodies）

二抗常常作为一抗的“助攻”，它并不直接结合抗原，而是识别一抗，并附带一个“放大器”（例如酶或荧光染料）。由于二抗可以同时结合多个一抗，附加的酶或荧光染料能够有效放大最终检测到的信号。因此，二抗在免疫检测中主要用于增强信号，提高灵敏度。常见类型包括酶标二抗（如HRP、AP），荧光标记二抗（FITC、PE）以及金标二抗等。

3. 酶（Enzymes）和底物（Substrates）

在免疫检测中，酶和抗体常常进行偶联，以利用酶催化底物进行显色或发光，使实验结果一目了然，产生信号。最常用的酶包括HRP（辣根过氧化物酶）和AP（碱性磷酸酶）。

以TMB显色原理为例，HRP与TMB反应能够产生蓝色或黄色，灵敏度极高，常用于ELISA和WB实验中。HRP与DAB反应则产生棕色沉淀，多用于免疫组化（IHC）。AP与BCIP/NBT则反应后呈现蓝紫色，适合对背景噪声较敏感的实验，非常适合免疫印迹（WB）使用。

4. 荧光素（Fluorophores）

除了通过酶催化产生显色反应，还可以为抗体附加荧光素，使用“荧光标签”使得在荧光显微镜下直接观察抗体与目标抗原结合的情况变得便利。常见的荧光素包括FITC（绿色荧光）、PE（橙红色荧光）及Cy5（远红外荧光）等。

5. 偶联试剂（Conjugation Reagents）

如之前所述，抗体需要与酶或荧光试剂进行偶联，才能将不可见信号转变为可检测信号。常用的偶联剂包括SMCC（交叉连接抗体与酶的“化学小帮手”）及EDC/NHS（将抗体与小分子底物“粘合”在一起）等。

在免疫检测试剂中，抗体是核心试剂。根据不同的生产工艺，免疫检测使用的抗体可分为单克隆抗体、多克隆抗体和重组抗体。在此之前我们先回顾一下抗体的基因重排，以帮助更好理解这三类抗体的差异。

1. 抗体基因的免疫重排原理

抗体的多样性源于B细胞通过免疫重排过程生成不同抗体。每个抗体由重链和轻链组成，这些链条由基因编码。为了产生能识别不同抗原的抗体，B细胞的基因经过“V(D)J重排”重新组合，形成完整的抗体基因。这一过程的随机性使每个B细胞产生的抗体具有独特的结合特性，能够识别不同的抗原表位。

2. 免疫检测抗体的不同类型

(1) 单克隆抗体（mAb）：取中一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后获得，具有超强的特异性，适用于精确检测。

(2) 多克隆抗体（pAb）：由于来自多个B细胞，能够识别抗原的不同表位，灵敏度较高。

(3) 重组抗体：通过基因工程技术合成并转染到细胞中生产，特异性和一致性优秀，适用于高端检测或药物开发。

上述内容为大家梳理了免疫检测试剂中常用的试剂。由于抗体来源和应用场景多样，往往需要花费时间进行选择。接下来的章节将为大家推荐国内外优秀的免疫检测试剂生产厂家，确保大家在需要时能够快速、有效地进行选择，助力实验进展。

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