细胞株是通过单细胞分离培养或筛选方法，从单细胞增殖形成的细胞群体。其特殊性质或标志需在整个培养过程中保持不变。然而，细胞株在体外培养时可能出现一些挑战，包括无法在培养皿上贴壁生长、增长缓慢以及细胞死亡等。以下是一些预防及解决措施。

一、细胞株无法在培养器皿上贴壁生长

1. **胰酶消化过度**：缩短胰酶消化时间或减少胰酶用量。

2. **支原体污染**：隔离相关细胞株，检测是否感染支原体；清洁通风厨和培养箱，若细胞受到污染，进行灭菌处理并丢弃。

3. **培养基缺乏附着因子**：使用无血清配方时，需要确保其中含有附着因子，或选择经过包被的培养板。

二、细胞株生长缓慢

1. **培养基或血清变化**：比较不同培养基配方中葡萄糖、氨基酸等成分的差异；通过生长实验对比新老批次的血清；增大初始接种密度，使细胞逐步适应新培养基。

2. **生长促进成分耗竭或缺乏**：更换原培养基，添加新鲜培养基或生长促进成分（如L-谷氨酰胺）。

3. **轻度细菌或真菌污染**：不添加抗生素进行培养，若细胞污染，进行灭菌处理并丢弃。

4. **存储不当**：血清应储存于-5℃至-20℃；培养基应避光储存于2℃~8℃，并尽量减少接触光线的时间。

5. **初始接种密度低**：增加活细胞的接种密度。

6. **细胞衰老**：丢弃老化的细胞，使用代数较少的细胞。

7. **支原体污染**：如前述，隔离细胞并检查感染情况，进行必要的灭菌处理。

三、培养基pH值变化迅速

1. **培养箱CO2设置错误**：根据培养基中NaHCO3的浓度来调整培养箱的CO2分压，NaHCO3浓度在20-37g/L时应相应使用5%-10%的CO2分压。

2. **培养瓶瓶盖过紧**：将瓶盖旋松约1/4圈以改善气体交换。

3. **缓冲系统不足**：加入HEPES缓冲液，使其终浓度保持在10-25mM。

4. **培养基盐分不当**：在CO2平衡环境中使用基于Earle平衡盐的培养基，而在常温环境下使用基于Hanks平衡盐的培养基。

四、细胞株凋亡

1. **培养箱CO2不足**：监测CO2使用情况，及时更换气瓶，并确保管路连接的密封性，尽量减少开启培养箱的频率。

2. **培养箱温度波动**：定期监测并校正培养箱内的温度。

3. **抗生素浓度过高**：适当减少抗生素的用量；在无血清培养基中，将抗生素浓度控制在1/10。

4. **复苏或冻存细胞损伤**：选择新的细胞进行操作。

5. **培养基渗透压不合适**：检查培养基的渗透压，大多数哺乳动物细胞可耐受260~350mOsm/kg的渗透压。

6. **培养基中的毒性代谢产物积累**：及时更换新的培养基以去除这些代谢产物。

五、悬浮细胞株集成团

1. **钙离子和镁离子影响**：使用不含钙和镁的平衡盐溶液清洗细胞，并轻轻吹打以形成单细胞悬液。

2. **支原体污染**：如前所述，需隔离细胞并进行检测。

3. **蛋白水解酶过度消化**：用0.001%DNA酶I处理细胞，随后用PBS冲洗后接种到新的培养基中。

以上是细胞株培养过程中可能遇到的问题及其解决方法，这些建议仅供参考。为确保细胞培养的顺利进行，强烈建议您使用尊龙凯时的高品质培养基和细胞株，助您解决各种细胞培养难题，提升实验效率及精确度。